Introducción

Uno de los componentes del sistema ELISA DAVIH Ag-P24  es el conjugado antip24-peroxidasa, obtenido al conjugar inmunoglobulinas (IgG) humanas anti p24 a peroxidasa; las cuales se purifican a partir de  sueros con altos títulos de anticuerpos contra la proteína p24 del  VIH-1. En la actualidad la tendencia en la producción de este tipo de componente es emplear IgG de especies diferentes al humano para aumentar la reproducibilidad y mejorar el desempeño de estos sistemas. El objetivo de este trabajo fue obtener un conjugado anti p24 a partir de IgG de conejo.

Materiales y Métodos

Se inocularon conejos con la proteína p24 del VIH-1 y se les monitoreó el título de anticuerpos anti p24 por ELISA. Las IgG-antiP24 se purificaron por cromatografía de afinidad (proteína A-Sefarosa) y se conjugaron a peroxidasa de rábano picante por el método del periodato de sodio. El conjugado anti p24–peroxidasa se caracterizó por  Western Blot (WB) de VIH-1(DAVIH-BLOT) y en el ELISA DAVIH Ag-P24.

Resultados

El título de anticuerpos contra la p24 por ELISA en los sueros fue 1:1250, lo cual resultó adecuado para la conjugación. El WB reveló reactividad contra las proteínas p55 y p24 del VIH-1, según lo esperado.  En el ELISA DAVIH Ag-P24 aun cuando se observó un ligero incremento en la señal de fondo en los sueros negativos evaluados, los valores de la curva patrón fueron similares al control utilizado.

Conclusiones

Se demostró la factibilidad de la obtención de un conjugado anti p24-peroxidasa a partir de una fuente alternativa de IgG antip24.